慢病毒转染建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)基因的BALB／c小鼠结肠腺癌细胞株(CT26)。用细胞悬液法构建结肠癌肝转移瘤模型，分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、人参皂苷Rg3组。采用切除原发瘤及人参皂苷Rg3治疗l0 d，通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长情况。应用组织切片苏木素-伊红染色法，观察肿瘤转移灶情况。SP免疫组织化学法检测转移瘤MVD及细胞增殖，TUNEL技术检测转移瘤细胞凋亡。
观察指标：
肝转移瘤的生长情况、肿瘤转移灶情况、转移瘤MVD、细胞增殖、转移瘤细胞凋亡。
统计学方法：
将所有数据用SAS8.2软件进行处理，荧光值按公式进行计算：平均荧光光子数=总光子数/荧光面积，相关性采用Spearman等级相关进行分析。计量资料以mean土SD表示，先采用方差分析比较各组均数，再用最小显著性差异法分析每2组之间差异，以P<0.05为具有统计学显著性差异。
结 果：
1）GFP在裸鼠剖离肝脏中的表达转移瘤组织
各组小鼠治疗后平均转移灶荧光值经方差分析有显著性差异，人参皂昔Rg3组较原发瘤切除组及原发瘤未切除组平均肝转移灶荧光值明显降低(P<0.01),原发瘤未切除组平均肝转移灶荧光值明显低于原发瘤切除组(P<0.01,表1, 图3,4)。
表1各组BAlB/c nu nu裸鼠治疗后肝脏转移瘤数及肝脏质量(mean±SD,n=10)
图3 治疗10d后BALB/c nu nu裸鼠结肠癌肝转移模型剖离肝脏情况 A：原发瘤切除组；B：原发瘤未切除组；C：人参皂苷Rg3组
图4荧光活体成像法观察治疗后结肠癌肝转移模型裸小鼠剖离肝脏GFP基因的表达.A:原发瘤切除组；B：原发瘤未切除 组;C:人参皂昔Rg3组.
2）人参皂甞Rg3对原发瘤切除后转移瘤细胞增殖和凋亡的影响
治疗后人参皂昔Rg3组与原发瘤切除组比较转移瘤细胞核Ki67的表达水平明显降低（P<0.01）,原发瘤未切除组细胞核Ki67的表达水平明显低于原发瘤切除组。
治疗后人参皂昔Rg3组细胞凋亡指数较原发瘤切除组和原发瘤未切除组有明显的升高（P<0.01,表2,图5）。
表2 各组BALB/c nu nu裸鼠结肠癌肝转移模型治疗后转移瘤MVD, Ki67及TUNEL表达水平(mean±SD,n=10)
图5 结肠癌肝转移模型中各组小鼠肝脏病理切片转移瘤情况(HE x 100), Ki67, CD34及TUNEL表达水平(SP染色x200, TUNEL染色x400). A.原发瘤切除组;B:原发瘤未切除组;C:人参皂昔Rg3组.
结 论：
人参皂昔Rg3对小鼠结肠癌原发瘤切除后转移瘤生长有明显的抑制作用，其机制可能是通过直接或间接的作用，减少血管生成，诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖。结合实验结果，我们认为结肠癌患者在原发瘤切除后，及时应用人参皂昔Rg3对抑制临床或亚临床转移灶生长 具有潜在的临床价值。
本文文献来源：郭刚，许建华等.人参皂苷Rg3对小鼠结肠癌原发瘤切除后肝转移瘤生长的抑制作用[J].世界华人消化杂志,2012,20(12).
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