人参皂苷Rg3对胃癌细胞株BGC-823增殖凋亡的影响

     本文是高川、张明亮共同发表在《浙江医学》杂志上的文章。目的是研究人参皂苷Rg3对胃癌细胞株BGC-823增殖凋亡及其对凋亡基因p53、S100A4表达的影响。研究表明，人参皂苷Rg3能显著抑制胃癌细胞株BGC-823细胞的生长，其抗肿瘤机制可能与上调p53基因，下调S100A基因的表达有关。

01材料与方法

细胞培养：

人胃癌细胞在含10%胎牛血清、青霉素100U/ml、链霉素100mg/ml的RPMI 1640培养液中培养。于37℃、5%CO₂恒温培养箱中培养，细胞呈单层生长，达80%左右时传代。

分组：

人参皂苷Rg3四组，浓度分别为62.5﹑125﹑250﹑500μg/ml、不接种细胞的空白对照组﹑不含药物的正常对照和阳性对照组[氟尿嘧啶（5-FU）的浓度为100mg/L]﹑等体积的二甲基亚砜（DMSO）溶剂对照，DMSO的浓度为0.4%。

检测指标：

通过MTT比色法检测细胞增殖抑制率、AO-EB双染法结合荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变、RT-PCR检测p53、S100A4基因的表达情况。

统计学处理：

采用SPSS16.0软件分析，所得计量资料用平均值±标准差表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。

02结果

不同浓度人参皂苷Rg3对人胃癌细胞株BGC-823生长的抑制作用比较

见表2。由表2可见，MTT比色实验结果表明：不同浓度人参皂苷Rg3作用BGC-823胃癌细胞，人参皂苷Rg3浓度越大对BGC-823细胞的抑制效果越明显。当人参皂苷Rg3浓度为250μg/ml时对BGC-823细胞的抑制率为45.3%，接近半数抑制浓度IC50，其有效作用时间为48h。阳性对照组对细胞的抑制率较其他各组高，与Rg3各浓度组和空白对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

Rg3诱导细胞凋亡的形态学分析

见表3，图1。AO-EB染色显示：空白对照组结构形态饱满，结构清晰，表现出均匀绿色的荧光。随着Rg3剂量的加大，荧光显微镜下凋亡细胞数增加，表现为：细胞核体积缩小，核固缩，凋亡小体形成，大量细胞碎片，细胞膜被染成红色（图1）。由表3可见，用药各组间两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）。         

RT-PCR检测p53、S100A4mRNA的表达

p53是促细胞凋亡的抗癌基因，p53的高表达可诱导细胞凋亡，通过RT-PCR方法检测，笔者发现随着Rg3干预浓度的上升（62.5、125、250、500μg/ml）可明显上调BGC-823细胞的p53 mRNA表达（图2），而S100A4 mRNA的表达随药物浓度增高出现逐渐下调的趋势。除了DMSO组和空白对照组比较没有差异外，其他各组两两比较差异均有统计学意义（均P＜0.05，图3）。

03结论

研究发现，不同浓度人参皂苷Rg3作用于胃癌细胞株BGC-823 48h后，随着药物浓度的增加，P53 mRNA表达逐渐上调，而S100A4 mRNA表达出现逐渐下调的趋势，这表明人参皂苷Rg3可能通过下调S100A4，减少S100A4通过蛋白激酶c介导的p53磷酸化途径的抑制，并上调p53，活化p53的激活依赖的细胞周期阻滞途径而诱导BGC-823细胞凋亡作用。

文献来源：浙江医学2012年第34卷第14期。